在SDS-PAGE 测定蛋白质分子量中，首先一般用凝胶渗透色谱法测定蛋白质的分子量:用HPLC测定几种已知分子量的蛋白质，画出调整保留时间对应的标准曲线，然后在同样条件下测定未知蛋白质的保留时间，未知蛋白质的分子量可与标准曲线进行比较；为什么蛋白质的相对分子量可以通过超速离心测量？因为不同分子量的蛋白质大小不同，会受到不同的离心力。在特定的离心加速度下，不同的蛋白质会分层，通过反复离心，我们可以提纯和提取一些蛋白质。
两种方法原理不同，有差异很正常。如果差距较大，要认真分析。一般凝胶层析是非变性的，SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳是变性的，二硫键也是还原的，所以是亚基(肽链)分子量。凝胶色谱与分子形状有关。通常，标记物是球状蛋白，因此测量球状蛋白的分子量更准确。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳与分子形状无关。有些蛋白质具有特殊性质，不适合用SDS凝胶电泳测定。
1。盐析和有机溶剂沉淀:在蛋白质溶液中加入大量中性盐，破坏蛋白质的胶体性质，使蛋白质从溶液中沉淀出来，称为盐析。常用的中性盐有硫酸铵、氯化钠、硫酸钠等。盐析时，溶液的pH值在蛋白质的等电点处最佳。任何能与水以任何比例混合的有机溶剂，如乙醇、甲醇、丙酮等。
大分子可以和小分子分开。4.色谱法:利用混合物中各组分的物理化学性质的差异，以及在相互接触的两相(固定相和流动相)之间的分布进行分离。主要有离子交换层析、凝胶层析、吸附层析和亲和层析，其中凝胶层析可用于测定蛋白质的分子量。5.分子筛法:又称凝胶过滤法，将蛋白质溶液加入到柱子顶部，让它向下漏，小。
蛋白质是根据什么原理，电泳分离蛋白质的:一般用生化的方法提取蛋白质。蛋白质有电荷吗？通过基于蛋白质pi的等电聚焦来聚焦混合样品中的蛋白质。电泳时，正极和负极都会发生电解反应，向相反电极移动的现象称为电泳。它是根据蛋白质的电荷不同，即酸碱性质不同来分离蛋白质混合物的方法。1.电泳:在外加电场的作用下，带点的粒子会向电性相反的电极移动，这种现象称为电泳。
区带电泳是由于在支持物上通过电泳将蛋白质混合物分成几个区带。电泳前，将支持物如薄膜或滤纸用缓冲溶液浸泡或直接用缓冲溶液配制成凝胶，将待分离的蛋白质样品加入到支持物的一端或中心，支持物两端连接电极，通电进行电泳。电泳后各组分分布在不同的区域，各组分用显色剂(蛋白质可用考马斯亮蓝或氨基黑染色)显色后即可显示。氨基酸混合物，尤其是寡核苷酸混合物，不能通过一次电泳完全分离。
这个问题我刚刚回答过一次:)SDS凝胶电泳测定的分子量是相对分子量，如果分子量太小或者大于> 200Kd，一般不做PAGE测定。SDS PAGE测定分子量，要求蛋白质有条带，然后与标准分子量的标志带位置比较，确定分子量。SDS PAGE的分离范围一般为15200Kd，超过此范围蛋白质条带全部挤在一起。
SDSPAGE确定蛋白纯度:如果蛋白是单肽链蛋白，电泳只得到一条蛋白带(两条带:一条是溴酚蓝，一条是蛋白带)；如果得到多条电泳带，应使用非SDS-page进行电泳，单一蛋白带为单一蛋白SDS-PAGE确定蛋白分子量:定义:r = de/dor为淌度，de为蛋白的电泳迁移距离，do为溴酚蓝的电泳迁移距离，lgMabRM为蛋白的分子量，A、B为常熟，A、B可由标准蛋白(已知分子量的蛋白)的淌度计算。
你漏了一点。聚丙烯酰胺凝胶可以形成大小均匀的网格结构，阻碍蛋白质分子通过，阻碍程度取决于分子的大小。我以为你自己也说了很多。据我所知，蛋白质的分子量很大，不可能精确测量，因为使用的刻度也是一些标准的标记物(蛋白质中的阶梯。当蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，其迁移取决于其电荷、分子大小和形状。
1)蛋白在运行SDSPAGE前要用蛋白处理液(沸水浴5分钟)处理，其中含有SDS，β巯基乙醇破坏了蛋白的四级结构(如果有的话)，处于游离亚基状态。2)2)SDS page的原理是蛋白质在动力装置中只按蛋白质的分子量运动，然后被分离。3)与标准分子量蛋白质(标志物)比较，可以得到待测蛋白质(亚基)的分子量。
找到钙蛋白的标准样品，不同浓度的HPLC分析后做工作曲线，然后取样品进行检测。根据工作曲线，可以计算出样品中蛋白质的真实含量，从而计算出纯度/含量；至于分子量，需要通过凝胶渗透色谱(GPC)来确定。首先，蛋白质的测定一般采用凝胶渗透色谱法:用HPLC测定几种已知分子量的蛋白质，画出调整保留时间对应的标准曲线，然后在相同条件下测定未知蛋白质的保留时间，未知蛋白质的分子量可与标准曲线进行比较；
不同的蛋白质大小不同，所以受到的离心力也不同。在特定的离心加速度下，不同的蛋白质会分层。通过反复离心，我们可以提纯和提取一些蛋白质。分子量小的先出去，分子量大的再出去，再找参考。离心分离生物大分子和亚细胞物质的基本原理是根据它们在液体介质中不同的沉降速度或不同的密度所形成的不同区带，以及在液体介质中停留的不同位置，将它们逐一分离。
如果蛋白质的相对分子量可以通过速度区(或速度梯度)离心来测量，这种方法是将样品放在连续的密度梯度液体上。通过离心，分子量大的蛋白质沉淀快，分子量小的沉淀慢，一段时间后，相同分子量的蛋白质在同一深度形成一条带，从而分离出各种分子量。适用于分离密度相同但大小不同的物质，蛋白质成分密度几乎相同，但分子量不同，用这种方法很容易分离。